Парциальные D-антигены и антитела

С 1951 г. по 1963 г. опубликована серия исследований, показавших, что лица D+, так же как D-, могут вырабатывать анти-О-антитела [216, 386, 446, 614, 645, 658, 671], реагирующие со всеми образцами эритроцитов D+, за исключением собственных. Авторы подчеркивали, что антиген D мозаичен и представлен на эритроцитах многими эпитопами, которые могут выступать в качестве самостоятельных иммуногенов.

Обычно эпитопы присутствуют на эритроцитах людей D+ в полном составе. Люди, имеющие неполный комплект эпитопов, способны вырабатывать антитела к отсутствующим у них компонентам. Фенотип таких людей назван частичным, или парциальным, D.

При адсорбции сывороток анти-D, полученных от людей D-, эритроцитами разных категорий частичного D не удавалось выделить фракции, способные распознавать отдельные эпитопы D-антигена. Элюаты, как правило, содержали антитела, идентичные тем, что находились в сыворотке изначально. Другими словами, антитела анти-D не сепарировались на отдельные эпитопные специфичности и представляли собой единую рецепторную структуру, направленную одновременно против множества D-эпитопов.

Антитела анти-D, присутствующие у лиц с парциальным D, имеют более узкий диапазон реагирования, чем анти-О-антитела лиц D-, поскольку в них отсутствуют рецепторы к отдельным эпитопам D. Иными словами, антитела, продуцируемые людьми с парциальным D, также являются парциальными.

По характеру перекрестного реагирования парциальные антитела разделили на группы.

Wiener, Unger и другие исследователи [216, 614, 645, 671, 716 ], установившие, что Rh_o-aHTHreH состоит из 4 компонентов (Rh^A, Rh^B, Rh^c и Rh^D), предложили классификацию Rh_Q^alP^habet. Если один из компонентов в фенотипе присутствовал, его обозначали индексом с заглавной буквой, если отсутствовал -строчной буквой. Таким образом, эритроциты фенотипа Rh^^ содержали компоненты Rh^A и Rh^B, а компоненты Rh^c и Rh^D в них отсутствовали. Как обнаружили исследователи, антитела, полученные от человека с эритроцитами Rh^A, реагировали с нормальными эритроцитами Rh_o и эритроцитами Rh^a, но не реагировали с эритроцитами Rh^A. Антитела, продуцируемые человеком, имевшим эритроциты Rh^B, реагировали с эритроцитами Rh_o и эритроцитами Rh^b, но не реагировали с эритроцитами Rh^B и т. д.

В настоящее время алфавитную классификацию Rh_o^alphabet не используют и она упоминается лишь как имеющая научно-познавательное значение.

Классификация по категориям, существенно расширенная в настоящее время, предложена Tippett и Sanger [657, 661].

Первая ее версия опубликована в 1962 и 1963 гг. Суммируя результаты исследования сначала 18, а затем 29 сывороток анти-D, полученных от лиц с парциальными D-антигенами, авторы выделили 6 категорий антигенов, отличающихся неодинаковым перекрестным реагированием (табл. 4.12).

КI категории D-антигенов был отнесен обычный D-антиген. Люди с антигеном категории DI анти-О-антител не вырабатывают.

Ко II категории отнесен антиген D, содержащийся у людей, которые продуцируют антитела против D-антигенов I, III, IV и V категории. К D-антигенам II и VI категории такие люди антител не вырабатывают.

К III категории отнесен антиген D, встречающийся у лиц, продуцирующих антитела против D-антигенов I, II и IV категории.

Антиген D IV категории отличается от антигена D лиц первых трех категорий. Люди, имеющие этот антиген, способны вырабатывать антитела к D-антигенам всех категорий, за исключением IV.

Отличительные признаки D-антигенов V и VI категории сводятся к тому, что люди, имеющие эти антигены, способны продуцировать антитела к антигенам D других категорий, но лишены этой способности в отношении собственного D-антигена.

Эритроциты, содержащие антигены D разных категорий, различаются по частоте реагирования со стандартными сыворотками анти-D, полученными от людей D-. Образцы эритроцитов, отнесенные к категории IV, агглютинировались 96 % сывороток анти-D, категории V - 74 %. Эритроциты категории VI реагировали только с 35 % сывороток анти-D.
Из данных, представленных в табл. 4.12, можно заключить, что не все эпитопы D одинаково иммуногенны. По-видимому, эпитопы, отсутствующие на эритроцитах D^VI, как раз и являются более иммуногенными, поскольку их отсутствие обусловливает низкий процент реагирующих с этими эритроцитами сывороток. Напротив, высокая частота реагирования Dⁿ, D^IH, D^IVсвидетельствует о том, что они лишены менее иммуногенных эпитопов. Если судить по данным табл. 4.14, к более иммуногенным следует отнести все эпитопы от epDl до epD9, а к менее иммуногенным - те, которые «прячутся» за знаком минус (отсутствие сильного эпитопа).

Вторую, обновленную версию своей классификации Tippett и Sanger опубликовали в 1977 г. [660]. Она включала 5 категорий парциальных D-антигенов (табл. 4.13). Категория I была исключена, так как выяснилось, что некоторые образцы крови, отнесенные к этой категории в первоначальной версии, содержали транзиторные анти-О-антитела. Категории III, IV и V подразделены на субкатегории: Ша, Illb, Шс; IVa, IVb и т. д. Новая версия не внесла принципиальных изменений в первоначальную, но, как комментировали Issitt и Anstee [374]: «дала элегантный серологический прогноз тех особенностей, которые позднее были обнаружены с помощью моноклональных эпитопспецифических aHTH-D-антител, а также в результате исследования генов, кодирующих частичные D-антигены». Позднее субкатегория Vc была упразднена, так как с помощью моноклональных aHTH-D-антител было показано, что антигены D^Vc и D^ivb представляют одну группу. Кроме того, были детализированы другие позиции (см. табл. 4.13).

Таблица 4.13

Взаимодействие эритроцитов и сывороток людей, содержащих парциальные D-антигены и парциальные анти-О-антитела*

Категория эритроцитов	Реакция анти-В-антител, полученных от лиц, имеющих эритроциты категории
Категория эритроцитов	II	Ша	ШЬ	Шс	IVal	IVa2	IVb	Va	Vb	Vc	Vli	Vlii
II	—	+	+	+	+	+	±	+	+	I	+	+
Ша		—	+	—		+	+		+	+		+
ШЬ	+	—	—	—	+	+	+	±		+	+	+
Шс		—	4-	—	+	+	+	+	+	+		+
IVa	—	1		—	—	—	—	+	+	—	+	+
IVb	—	1			—	—	—	—	—	1	+	—
Va	+	—		—	+		+	—	±	—	+	—
Vb	+	—		—	+	—	—	—	—	—	—	—■
Vc	+	—	+	—	\|	—		—	—	—		—
VI	—	—	+	—	+	—	+	—	—	—	—	—

* По Tippett, Sanger [660] и другим источникам.

Лица, имеющие эритроциты категории D^HI (a, b и с), содержат 2 разных анти-О-антитела. Об этом свидетельствует тот факт, что эритроциты D¹¹, D¹¹¹ и других категорий реагируют с этими сыворотками неодинаково. В частности, анти-О-антитела людей D^IIIb агглютинируют эритроциты D¹¹, D¹¹¹³"^. В то же время эритроциты D^IIIa и D^lllc сыворотками лиц D^IIIb практически не агглютинируются. Такая же двойная специфичность характерна для антител, продуцируемых лицами D^VI. Так, лица и D™' продуцируют 2 типа антител, один из которых реагирует с эритроцитами D^IVb, D^Va и D^Vc, а другой с этими эритроцитами не реагирует. Анти-О-антитела, вырабатываемые лицами D^IVa и D^Ivb практически однотипны, так же как и антитела, вырабатываемые лицами D^Va, D^vb и D^Vc.

Эритроциты D^IIIb представлены двумя группами. К одной группе относят эритроциты, содержащие антиген G (G+), к другой Ё не содержащие этого антигена (G-). Некоторые образцы эритроцитов категории D^IVa не содержат антигена Go^a (Go⁸-), другие содержат (Go^a+). Щ'

Моноклональные антитела анти-D, будучи узконаправленными, более контро-астно дифференцируют отдельные эпитопы D-антигена в отличие от поликло-нальных парциальных антител, часто комбинированных с другими антителами.

В табл. 4.14 приведена характеристика парциальных антигенов, составленная на основании данных, полученных разными авторами с помощью метода конкурентного связывания [384,385,445,446,659].

Новые обнаруженные фенотипы (DFR [445], DHR [385], DBT, DNU, DHMi, DHMii [384], DTI [513] и др.) пока не отнесены к какой-либо категории.
Обращает на себя внимание тот факт, что эритроциты категории D^IIIa, D^IIIbи D^IIIC несут на себе все 9 эпитопов D. В то же время известно, что лица с эритроцитами категории D¹¹¹ способны вырабатывать аллоиммунные анти-О-антитела [660, 661]. Это обстоятельство со всей очевидностью указывает на то, что в эритроцитах D¹¹¹ отсутствуют какие-то неизвестные эпитопы D, которые не внесены в таблицу 4.14. Антитела к этим эпитопам пока не найдены. Аналогично ведут себя эритроциты категории Dⁿ,D^IV, D^vhD^VI¹, которые в одних случаях реагируют с сыворотками анти-D, а в других не реагируют в зависимости от совпадения специфичности парциальных антигенов и парциальных антител.
Castilho и соавт. [198], обследовав 130 больных серповидно-клеточной анемией, обнаружили у 12 из них парциальный антиген D^IIIa. Авторы отмечают, что повышенная частота этого антигена при данной патологии увеличивает риск аллоиммунизации пациентов, основным методом лечения которых являются трансфузии эритроцитов. Кроме того, интересен сам факт повышенной частоты антигена D^IIIa при указанном заболевании. Возможно, неправильная форма эритроцитов и отсутствие в их мембране отдельных структурных элементов (эпитопов антигена D) каким-то образом связаны.

Calligas и соавт. [190] обследовали 162 больных серповидно-клеточной анемией, получавших трансфузии эритроцитов. У 15 из них авторы обнаружили резус-антитела, у 13 - антитела анти-К.

Эритроциты категории D^IVa не несут на себе эпитопов epDl, epD2, epD3 и epD9, однако реагируют сильнее с большинством стандартных анти-D-сывороток, чем эритроциты, имеющие эти эпитопы. Считается, что эпитопы D на эритроцитах категории D^IVa более доступны для анти-Б-антител и, возможно, присутствуют в большем количестве, чем на других эритроцитах D+.

У лиц, носителей антигена категории D^VI I типа, экзоны 4 и 5 гена сЕ замещены аналогичными экзонами гена D. У лиц, носителей антигена категории D^VIII типа, экзоны 4, 5 и 6 гена Се замещены аналогичными экзонами гена D.

Wagner и соавт. [690] нашли новый парциальный D-антиген - DBS, или D^v-like, являющийся разновидностью антигена D^Va. Этот антиген |содируется ги-^щ^фт геном RHD-R^^(5)-RHD с делецией интрона 4 и частщэкзона 5. На эритроцитах D^v-like отсутствуют эпитопы epD4, ерШ2, epD17, epD18 и epD22, которые обычно присутствуют на эритроцитах D^Va. Указанное отличие антигена D^v-like от антигена D^Va было ассоциировано только с одной нуклеотидной заменой А 226 Р, которая, видимо, и привела к выпадению некоторых эпитопов. Ранее Wagner и соавт. [691] описали разновидности парциальных антигенов D^ivb-like, DNU-like и DFR-like, различающиеся точками мутаций в RHD-тене и отсутствием некоторых эпитопов (табл. 4.15). По данным Zhou и соавт. [729], полиморфизм антигена D^Va обусловлен гибридным геном RHD/CE, в котором экзон 5 и интрон 5 гена D замещен гомологичными последовательностями гена СЕ.

Таблица 4.15

Разновидности парциальных антигенов D^IV, DNB, DFR

Фенотип (категория парциального D-антигена)	Количеств о случаев	Нуклеотидная замена в гене RHD	Недостающие эпитопы D на эритроцитах
D^-like (D™ IV типа)	3	D350 m Н, G353 ^W,A354-+N	1-6,23,31 34-36
DNU-like (DNB)	2	G355 Ш S	6,31
DFR-like (DFR)	1	Н166 Р	10,11,22,31,32

Flegel и соавт. [288,289] обнаружили III тип парциального антигена D^. В категории III типа экзоны 3, 4, 5 и 6 гена D замещены эквивалентными частями гена Се. Авторы нашли, что число антигенных участков на 1 клетку для разных типов антигена составляет: для I типа - 500, для II типа - 2400 и для

Ш типа - 12 000. Таким образом, эритроциты, несущие антиген III типа, содержат нормальное для эритроцитов D+ количество антигенных участков.

Два типа эритроцитов (I и III) содержат антиген BARC (Rh52), эритроциты II типа не содержат этого антигена.

Jones и соавт. [385] описали новый парциальный антиген - DHR. Фенотип DHR обусловлен одной мутацией - G 686 —► А - в экзоне 5 гена Д которая приводит к замене Arg 229 —► Lis в 4-й экзофациальной петле полипептида D. Аминокислотная замена приводит к утрате epD 1, epD2, epD 12 и epD20.

Генная конверсия считается более частым механизмом появления парциального D-фенотипа. Однако есть несколько примеров простых замен, обусловливающих парциальные антигены D различных категорий: D^m - Leu ПО —► Pro [589, 694], D"-Ala 354 У Asp [144], DNU - Gly 353 Л Arg [144], DHMi - Thr 285 -* He [384].

В 2004 г. Kormoczi и соавт. [395] описали парциальный D-антиген, названный ими DWI. Он был обнаружен у 74-летней жительницы Восточной Австрии, имевшей группу крови 0(1) Rh+. Сыворотка женщины содержала анти-О-антитела, что послужило основанием заподозрить у нее парциальный вариант D. В анамнезе имелись 2 беременности от мужа D+ и несколько ге-мотрансфузий в связи с гинекологической операцией. Женщина и 2 ее родственницы (сестра и племянница) имели генотип DWICe/cde. На эритроцитах

DWI+ отсутствовали редкие антигены ЦЦ V₉ VS, D^w, Go^a, Evans, Tar, Riv, FPTT, BARC, JAL, которые ассоциированы с парциальными антигенами D, Сс или Ее. Антигенная емкость эритроцитов DWI+ составила 8000-8600 антигенных участков на 1 эритроцит. При семейном исследовании установлено, что антиген DWI передается с гаплотипом DWICe, но не с DWIce. При эпитоп-ном картировании зафиксирована незначительная модификация антигена D, проявляющаяся в виде ослабленной экспрессии эпитопов Dl.l, D9.1 и D16.1. При ДНК-типировании авторы нашли в экзоне 7 гена RHD простую нуклео-тидную замену Т 1073 —> С, приводившую к замещению Met 358 —> Thr в 6-й экстрацеллюлярной петле D-полипептида.

Эритроциты DWI+ не агглютинировались одной из 79 моноклональных анти-D-cbmopoTOK, хорошо реагировавших с другими фенотипами D+. Авторы применили эту сыворотку для отсева лиц D+, с тем чтобы среди оставшихся нереагирующих или слабореагирующих образцов найти DWI+. Однако среди 2288 резус-положительных австрийцев антиген DWI выявлен не был, за исключением трех упомянутых выше женщин.

Вначале была предложена 9-эпитопная модель парциальных D-антигенов. Специально отобранные моноклональные антитела дифференцировали 8 эпитопов антигена D (epDl-epD9). Эпитопы D6 и D7 были объединены в epD6/7, так как серологические реакции эритроцитов, несущих эти эпитопы, оказались практически одинаковыми.

Faas и соавт. [276] предложили 15-эпитопную модель, в которой эпитопы epDl, epD2, epD5, epD6/7 и epD9 подразделяют на субэпитопы (Dl.l, D1.2; D5.1, D5.2; D9.1, D9.2 и т. д.) - от 2 до 10 субэпитопов в каждом эпитопе. Кроме того, авторами установлено 6 новых эпитопов, получивших номера с 10 по 15.

Jones и соавт. [386] разработали модель, включающую 30 серологически различимых эпитопов D (табл. 4.16). Как видим, эпитопная конструкция антигена D, сложившаяся к настоящему времени, еще далека от своего завершения.

Новые материалы

Старые материалы