Можно ожидать, что эритроциты людей с генотипом cDE/cDE будут нести больше антигенных участков сиЕ, чем эритроциты с генотипом Cde/cDE, потому что человек cDE/cDE имеет 2 гаплотипа, кодирующих продукцию этих антигенов, а человек Cde/cDE - только один. Точно также лица CDe/CDe должны иметь в эритроцитах больше антигена С, чем лица CDe/cDe.
Разницу в количестве антигена иногда можно обнаружить титрованием сыворотки анти-с, анти-Е или анти-С с соответствующими эритроцитами. При этом сыворотки нередко имеют более высокий титр с клетками, несущими двойную дозу антигена, и агглютинация с ними может быть выражена сильнее. Однако такой метод установления гомо- или гетерозиготности неточен из-за значительной вариабельности числа реагирующих антигенных участков на эритроцитах людей с, казалось бы, одинаковым генотипом. Кроме того, далеко не со всеми сыворотками выявляют дозозависимый эффект.
Измерение количества того или иного антигена Rh у близких родственников позволило получить более точные результаты, так как имелась возможность с помощью серологических проб установить, кто из членов семьи гомо-, а кто гетерозиготен по гену Д и замерить с помощью подобранных сывороток количество антигена у этих лиц в сравнительном аспекте. Ген D в одной или двух копиях у детей в пределах одной семьи очень точно дозирует одинарную и двойную порцию антигена [393, 576].
Lewis и соавт. [438], Chown, Lewis [218] предложили способ определения гомо- и гетерозиготного варианта гена D по скорости реакции эритроцитов со специально стандартизированными для этой цели сыворотками анти-D. Другие исследователи [463] различали гомо- и гетерозигот по количеству анти-D-антител, адсорбированных на их эритроцитах, используя для этого антигло-булиновые сыворотки, меченные ферритином. Такие методы в достаточной степени приемлемы для идентификации гомо- и гетерозиготного варианта гена D у членов одной семьи, но дают весьма противоречивые результаты при определении зиготности гена D у людей, не связанных родством.
Установление гомо- и гетерозиготности гена D и других генов групп крови имеет значение для прогнозирования ГБН у женщин, имеющих аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (как правило, анти-D) и ранее родивших детей с ГБН. В таких случаях важно выяснить, является ли муж гомо- или гетерозиготным по гену D. В случае, если он гетерозиготен, например CDe/cde, а предыдущая беременность женщины закончилась рождением ребенка Rh+, то с вероятностью 75 % можно прогнозировать, что при следующей беременности плод будет Rh-f*. Если при второй беременности, вопреки ожиданиям, снова родился ребенок Rh+, то возможность рождения ребенка Rh- в третий раз возрастает до 90 %. В том случае, когда муж гомозиготен по гену Д все дети будут резус-положительными и родить здорового ребенка в такой семье будет проблематично, если вовремя не предпринять соответствующие меры: патронаж с ранних сроков беременности, наблюдение за динамикой антител, досрочное родоразре-шение кесаревым сечением.
В последние годы разработаны более надежные методы определения зи-готности в супружеских парах, а также методы определения резус-принадлежности плода на ранних стадиях беременности по ДНК амниоцитов.
Наиболее надежным методом измерения количества антигенов Rh на эритроцитах как членов одной семьи, так и неродственных лиц является проточная ци-тометрия с использованием МКА [339].
Для подсчета числа антигенных участков на эритроцитах ряд исследователей использовали радиоактивно меченные сыворотки с различной Rh-cne-цифичностью, а также меченные радиоактивной меткой или ферритином анти-глобулиновые сыворотки против IgG человека [189, 364, 464, 568, 635]. О числе участков судили по количеству меченого субстрата, связавшегося с эритроцитами. Результаты многих исследований в основном совпадали: гомозиготы содержали больше антигенных участков, чем гетерозиготы. Таким образом, эффект дозы в Rh-системе существует, хотя и не проявляет себя в 100 % случаев, что еще раз свидетельствует о полиморфизме системы.
Количество антигенных участков на 1 эритроцит (тыс. ау/эр) для каждого антигена различно (см. табл. 4.10). У гомозигот DID - 14-33 тыс. ау/эр, у гетерозигот D/d их количество меньше - 10-20 тыс. ау/эр. Причем у гомозигот CDe/CDe число D-антигенных участков на один эритроцит меньше (до 19 тыс. ау/эр), чем у гомозигот cDE/cDE (до 33 тыс. ау/эр), что обусловлено, как указано выше, позицией транс гена С. Лица с генотипом -D-/-D- имеют наибольшее количество D-антигена (до 200 тыс. ау/эр), что, по-видимому, связано с отсутствием супрессирующего влияния на ген D других генов RH или же неясным пока компенсаторным механизмом, направленным на замещение недостающих в мембране структурных элементов.
У гомо- и гетерозигот (СС и Сс, ЕЕ и Ее) прослеживается такая же зависимость: гомозиготы продуцируют больше антигена, чем гетерозиготы.
По количеству занимаемых участков антигены Rh-Hr распределяются в следующей последовательности: c>C>D>E>e> Fya > G. Если сравнить эту последовательность со шкалой иммуногенности антигенов Rh и других трансфузион-но опасных антигенов (D>K>E>c>Cw>e>C> Fya), то станет ясно, что количество антигенных участков на эритроцитах не определяет степень иммуногенности того или иного антигена, по крайней мере, в рассматриваемой антигенной системе. Антиген с (hrf), имеющий максимальное число антигенных участков на 1 эритроцит (до 85 тыс.), занимает четвертое место по степени своей иммуногенности после антигенов D (Rho), К (KEL1) и Е (rhff), имеющих значительно меньше (от 3 тыс. до 33 тыс.) антигенных участков. В то же время антиген К, имеющий 3,5 тыс. ау/эр, стоит на втором месте после наиболее иммуногенного фактора - D. Антиген С (rh'), представленный 56 тыс. ау/эр, занимает лишь седьмое место в шкале иммуногенности, а антиген Fya отстоит от антигена К на 6 позиций.
Итак, степень иммуногенности того или иного субстрата обусловлена в первую очередь качественным составом. Однако нельзя полностью исключить возможную зависимость иммуногенности от количества антигена, например отсутствуют данные о степени иммуногенности эритроцитов сс и сС, имеющих соответственно 85 и 37 тыс. ау/эр, для реципиентов СС. Можно предположить, что в большой выборке сравнительных наблюдений иммуногенность эритроцитов сс окажется большей, чем эритроцитов сС, а иммуногенность эритроцитов DD лиц cDE/cDE - большей, чем эритроцитов Dd лиц CDe/cde.